기술 데이터
c18 담수화용 컬럼/플레이트 사용 설명서
제품 소개
C18 탈염 컬럼/플레이트는 C18 실리카겔 매트릭스로 채워져 있으며, 이 매트릭스의 작용기인 옥타데실은 높은 소수성과 비극성 화합물에 대한 탁월한 머무름 특성을 가지고 있습니다. C18 탈염 컬럼/플레이트는 염 머무름 없이 DMT를 함유한 프라이머/올리고/DNA 분자를 흡착하여 고순도 프라이머/올리고/DNA 생성물을 생성합니다.
선택 가이드
BM Life Sciences는 다양한 크기의 C18 탈염 컬럼/플레이트를 제공하며, 프라이머/올리고 농도에 따라 적합한 탈염 컬럼을 선택할 수 있습니다. 일괄 처리의 경우, 96웰 탈염 플레이트를 선택할 수 있습니다.
| 제품 번호 | 표준 | 적용 가능한 올리고뉴클레오타이드 사양 | 참조 단계 |
| SPEC18W150 | 50mg/1mL | 10nmol - 200nmol | 5단계 |
| SPEC18W3100 | 100mg/3mL | 10nmol - 600nmol | 1단계 |
| SPEC18W3300 | 300mg/3mL | 10nmol - 2.000mol | 2단계 |
| SPEC18W61000 | 1g/6mL | 1 우몰 - 6 우몰 | 3단계 |
| SPEC18W9630 | 30mg/96웰 플레이트 | 5nmol - 100nmol | 4단계 |
| SPEC18W9650 | 50mg/96웰 플레이트 | 10nmol - 200nmol | 4단계 |
| SPE15C18W9680 | 80mg/96-well 플레이트(1.5ml 96-well 플레이트) | 10nmol - 500nmol | 5단계 |
| SPE23C18W9680 | 80mg/96웰 플레이트(2.3ml 96웰 플레이트) | 10nmol - 500nmol | 5단계 |
메모
C18 세척 컬럼/플레이트는 HPLC 및 PAGE 정제 후 원료 산물과 프라이머/올리고의 염을 제거할 수도 있습니다. 자세한 내용은 5단계를 참조하세요.
시약
아세토니트릴 크로마토그래피 등급
0.1 M TEA, PH7.0
0.5M 염화나트륨
세척 용액(0.5 M Nacl에 용해된 5% 아세토니트릴)
3% 트리플루오로아세트산(TFA)
탈이온수
20% 아세토니트릴
TE 완충액: 10mmol/L Tris-cla, 1mmol/L EDTA, PH 8.0
1단계
샘플 준비
올리고뉴클레오타이드 샘플에 0.5 M NacI를 첨가하여 용량을 2 mL로 만듭니다.
담수화 컬럼 활성화
활성화: 컬럼을 활성화하기 위해 아세토니트릴 1mL를 사용했습니다.
평형화: 0.1 M TEAA 용액(PH7.0) 1 mL로 컬럼의 균형을 맞춥니다.
세척 과정
1. 올리고뉴클레오타이드가 함유된 용액 2mL를 담수화 컬럼에 통과시킵니다.
2. 실패한 시퀀스를 제거하려면 1mL의 플러싱 용액으로 컬럼을 2번 헹굽니다.
3. 염분을 제거하기 위해 1ml의 탈이온수로 컬럼을 2번 헹굽니다.
4. DMT를 제거하기 위해 3% 트리플루오로아세트산 1ml로 컬럼을 2회 헹구고 흡착층이 주황색-빨간색으로 변하는지 관찰합니다.
5. 탈염 컬럼을 1mL의 탈이온수로 두 번 헹궈서 삼불화아세트산과 잔류염을 제거합니다.
6. 20% 아세토니트릴 1ml를 용출하여 조립합니다.
2단계
샘플 준비
올리고뉴클레오티드 샘플에 0.5 M NacI를 첨가하여 부피를 4 mL로 만듭니다.
담수화 컬럼 활성화
활성화: 2 mL의 아세토니트릴을 사용하여 컬럼을 활성화했습니다.
평형화: 2mL 컬럼을 0.1M TEAA(PH 7.0)로 평형화합니다.
세척 과정
1. 올리고뉴클레오타이드가 함유된 용액 4mL를 담수화 컬럼에 통과시킵니다.
2. 실패한 시퀀스를 제거하려면 2ml의 플러싱 용액으로 컬럼을 2번 헹굽니다.
3. 염분을 제거하기 위해 2ml의 탈이온수로 컬럼을 2번 헹굽니다 ;)
4. DMT를 제거하기 위해 3% 트리플루오로아세트산 2ml로 컬럼을 2번 헹구면 흡착층이 주황색-붉은색으로 변합니다.
5. 2mL의 탈이온수와 탈염수로 컬럼을 두 번 헹궈서 삼불화아세트산과 잔류염을 제거합니다.
6. 20% 아세토니트릴 2ml를 용출하여 조립합니다.
3단계
샘플 준비
올리고뉴클레오타이드 샘플에 0.5 M Nac을 첨가하여 10 mL의 용량을 만듭니다.
담수화 컬럼 활성화
활성화: 5 mL의 아세토니트릴을 사용하여 컬럼을 활성화했습니다.
평형화: 컬럼은 0.1m TEAA(PH 7.0) 10mL로 균형을 이루었습니다.
세척 과정
1. 올리고뉴클레오타이드를 함유한 10mL의 용액을 담수화 컬럼을 통과시켰습니다.
2. 실패한 시퀀스를 제거하기 위해 컬럼을 5mL의 플러싱 용액으로 두 번 세척했습니다.
3. 염분을 제거하기 위해 5mL의 탈이온수로 컬럼을 두 번 헹굽니다.
4. DMT를 제거하기 위해 5mL의 3% 삼불화아세트산으로 컬럼을 두 번 세척하고 흡착층이 주황색-빨간색으로 변했는지 확인하세요.
5. 5ml의 탈이온수로 컬럼을 두 번 헹궈서 삼불화아세트산과 염 잔류물을 제거합니다.
6. 20% 아세토니트릴 5ml를 용출하여 수집합니다.
4단계
샘플 준비
올리고뉴클레오타이드 샘플에 0.5 M Nacl을 첨가하여 0.5 mL의 용량을 만듭니다.
96웰 플레이트 활성화
활성화: 96웰 플레이트의 각 웰에 아세토니트릴 0.5mL를 통과시켰습니다.
평형: 96웰 플레이트를 0.1M TEAA 용액(pH 7.0) 0.5mL로 평형화합니다.
세척 절차
1. 올리고뉴클레오타이드가 함유된 용액 0.5mL을 96웰 플레이트에 통과시킵니다.
2. 96웰 플레이트를 0.5mL의 세척액으로 2번 헹궈서 잘못된 시퀀스를 제거합니다.
3. 96웰 플레이트를 0.5mL의 탈이온수로 2번 헹궈서 염분을 제거합니다.
4. 96-well plate를 0.5ml의 3% trifluoroacetic acid로 2회 세척하여 DMT를 제거하고 흡착층이 주황색-붉은색으로 변하는 것을 관찰합니다.
5. 96웰 플레이트를 0.5mL의 탈이온수로 두 번 헹궈서 삼불화아세트산과 소금 잔류물을 제거합니다.
6. 20% 아세토니트릴 0.5ml를 용출하여 물질을 수집합니다.
5단계
샘플 준비
올리고뉴클레오타이드 샘플에 0.5 M Nacl을 첨가하여 부피를 1.2/2 mL로 만듭니다.
96웰 플레이트 활성화
활성화: 96웰 플레이트의 각 웰에 아세토니트릴 1~4ml(0.5mL)를 넣습니다.
평형화: 96웰 플레이트를 0.1 M TEAA 용액(PH 7.0) 0.5 mL 1-4 mL로 평형화합니다.
세척 과정
1. 올리고뉴클레오타이드가 함유된 용액 0.5-2 mL를 96웰 플레이트에 통과시킵니다.
2. 세척액 1/2mL로 96웰 플레이트를 두 번 헹궈서 불행한 시퀀스를 제거하세요 ;)
3. 96웰 플레이트를 1/2mL의 탈이온수로 두 번 헹궈서 염분을 제거합니다.
4. 96-웰 플레이트를 3% 삼불화초산 1/2ml로 2회 세척하여 DMT를 제거하고 흡착층이 주황색-붉은색으로 변하는 것을 관찰합니다.
5. 96웰 플레이트를 1/2mL의 탈이온수로 2번 헹궈서 삼불화아세트산과 소금 잔류물을 제거합니다.
6. 20% 아세토니트릴 1/2ml을 용출하고 물질을 수집합니다.
6단계
시약
아세토니트릴 크로마토그래피 등급
0.05 M 차, pH 7.0
2개월차, pH 7.0
탈이온수(RNase 없이 RNA 분자의 염분 제거 및 정제용) 60% 아세토니트릴(0.5% NH4OH를 함유한 물에 용해)
20% 아세토니트릴(탈보호 후 DNA 또는 RNA 분자의 염분 제거)
TE 완충액: 10mmol/L Tris-cla, 1mmol/L EDTA, PH 8.0
샘플 준비
HPLC 정제 올리고: HPLC 정제 올리고에 0.1 M TEAA를 적정량 첨가하여 최종 아세토니트릴 농도가 5% 이하가 되도록 합니다. 정제 올리고: 올리고뉴클레오티드가 포함된 겔 조각을 0.05 M TEAA에 녹인 후, 겔 조각을 제거하고 올리고를 최소 2 mL의 0.1 M TEAA에 녹입니다.
NH4OH 또는 AMA에 용해된 올리고당: 건조될 때까지 증발시킨 후 0.1 M TEAA 2 mL에 용해합니다.
담수화 펌프 작동
활성화: 컬럼을 활성화하기 위해 아세토니트릴 1mL를 사용했습니다.
평형화: 1 mL 2 M TEAA 컬럼(pH 7.0)을 균형화합니다.
HPLC 정제를 위한 올리고스 담수화 절차
1. 올리고뉴클레오타이드가 포함된 용액을 담수화 컬럼에 통과시킵니다.
2. 탈염수 컬럼을 1mL의 탈이온수로 두 번 헹궈서 염분을 제거합니다.
3. 60% 아세토니트릴 1ml 컬럼으로 용출하여 수집합니다.
PAAG법으로 정제된 올리고당 탈염 공정
1. 올리고뉴클레오타이드가 포함된 용액을 담수화 컬럼에 통과시킵니다.
2. 탈염수 컬럼을 1mL의 탈이온수로 두 번 헹궈서 염분을 제거합니다.
3. 60% 아세토니트릴 1ml 컬럼으로 용출하여 수집합니다.
DNA 올리고 합성 후 탈염 절차
1. 올리고뉴클레오타이드가 포함된 용액을 담수화 컬럼을 통과시킵니다.
2. 실패한 시퀀스를 제거하려면 1mL 0.1M TEAA 컬럼을 두 번 헹굽니다.
3. 탈염수 컬럼을 1ml의 탈이온수로 두 번 헹궈서 염분을 제거합니다.
4. 컬럼을 20% 아세토니트릴 1ml에 통과시키고 조립합니다.
RNA 올리고 합성 후 탈염 과정
1. 올리고뉴클레오타이드가 포함된 용액을 담수화 컬럼에 통과시킵니다.
2. 컬럼을 2 ml의 0.1 M TEAA로 헹굽니다.
3. RNase가 없는 물 2mL로 컬럼을 헹굽니다.
4. 20% 아세토니트릴(RNase가 없는 물) 2ml를 컬럼에 통과시키고 용출한 후 수집합니다. 올리고뉴클레오타이드 저장
올리고뉴클레오티드를 20% 아세토니트릴에 녹여 4°C에 보관하면 미생물의 성장을 막을 수 있으며 단기 보관에 적합합니다.
20% 아세토니트릴 용액(또는 TE와 같은 알칼리성 완충액에 용해된 용액)에 담긴 올리고뉴클레오티드는 -20°C와 같이 낮은 온도에서도 장기간 보관할 수 있습니다.
동결건조 분말 형태의 올리고뉴클레오타이드는 장기간 보관이 가능합니다.
경고
사용되는 시약의 양은 단지 권장사항일 뿐이며 각각의 경우에 맞게 최적화해야 합니다.
사용되는 시약의 양은 단지 권장사항일 뿐이며, 사례별로 최적화해야 합니다.
탈염 컬럼은 컬럼/플레이트 상의 잔류물을 용출하고 컬럼/탈염 플레이트의 결합력을 향상시키기 위해 충분한 활성화 평형을 거쳐야 합니다. 합성된 올리고뉴클레오타이드의 샘플링은 세척 및 교차 오염을 위해 CPG 분말이 컬럼/플레이트에 유입되는 것을 방지하기 위해 천천히 수행해야 합니다.
C18 담수화 컬럼/웨이퍼는 실리카 매트릭스를 사용하며, 적용 가능한 pH 범위는 2-7입니다. PH > 7.5에서는 실리카 매트릭스가 쉽게 용해되고, PH
TFA를 이용해 DMT의 염을 제거할 때는 시간에 주의하세요. 시간이 너무 길면 퓨린이 제거되는 효과가 있습니다.
붙어 있다
B&M Universal CPG Frits 합성 컬럼 급속 탈염 및 정제 기술
B&M Universal CPG Frits 합성 컬럼 급속 담수화 및 정제 기술:
B&M Universal CPG Frits는 수입 초고분자량 초순수 폴리에틸렌과 수입 CPG 분말을 특수 기술로 가공하여 합성 컬럼에서 합성 효과가 좋고 돌연변이율이 낮으며 제품 품질이 신뢰할 수 있습니다.
Dr.Oligo/Mermade 시리즈 합성기에서 합성이 완료되고 암모니아가 용해되면 Oligo를 합성 컬럼으로 직접 용출시키고, 주입 및 배수 후 추가 정제 단계 없이 일상적인 PCR 반응에 직접 사용할 수 있습니다. 이는 작동이 편리하고 비용이 절감되며 배송이 빠릅니다!
작업의 구체적인 단계는 다음과 같습니다.
1, 합성 B&M Universal CPG Frits 합성 컬럼/플레이트/s 400ul, 75% 아세토니트릴 초순수 혼합물은 합성 잔류 시약을 제거하기 위해 두 번 세척했습니다.
2, B&M Universal CPG Frits 합성 암모니아 가암모니아 분해 컬럼/플레이트, 90°C, 80PSI, 암모니아 가암모니아 분해 2-2.5시간;
3, 100% 아세토니트릴 400L 세척 합성 컬럼/플레이트, 2회;
4. 90% 아세토니트릴 초순수 혼합물 400ul 세척 합성 컬럼/플레이트, 2회, 펌핑 건조;
5. 합성 컬럼/플레이트에서 프라이머를 용출하기 위한 적절한 용출액의 양. 용출액은 초순수일 수 있으며, 3% 트리에틸아민 초순수 혼합물일 수 있고, 약 20% 아세토니트릴 초순수 혼합물일 수도 있습니다.
6. 용출액은 측정, 분주, 배수, 포장 및 배송이 가능합니다.